商品屬性：

Fluo-4 鈣離子檢測試劑盒是一種基于 Fluo-4 AM 鈣離子熒光探針檢測細胞內鈣離子濃度的試劑盒。本試劑盒可以使用熒光顯微鏡進行熒光成像檢測，也可以使用熒光酶標儀或流式細胞儀進行熒光的定量檢測。使用熒光顯微鏡或熒光酶標儀還可以進行細胞內鈣離子濃度的動態變化檢測。Fluo-4 是一種將 Fluo-3 結構中的 Cl 離子替換成 F 離子的鈣熒光探針。由于將 Cl 離子替換成了電子吸引力更強的 F 離子，它的最大激發波長會向短波長方向偏離 10 nm 左右。這個波長更接近于氬激光器的波長，所以用氬激光器激發時，Fluo-4 的熒光強度比 Fluo-3 更強。

標記：

1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。

2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養基。

【注】：①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養箱中將培養板培養適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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